畜禽養(yǎng)殖場作為動物疫病傳播的源頭,在疫病發(fā)生時及時進(jìn)行病原診斷,采取相應(yīng)的應(yīng)對措施,是目前動物疫病防控的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。
目前國內(nèi)動物疫病的病原學(xué)診斷試劑選擇范圍有限。而在通用的血清學(xué)檢測試劑中,絕大多數(shù)是檢測血清中抗體的免疫試劑,其結(jié)果更多反應(yīng)了疫苗免疫效果,對病原感染只能間接分析,無法確診,何況動物在遭受感染后,病毒要在體內(nèi)潛伏一段時間,動物才會產(chǎn)生抗體,檢測結(jié)果往往滯后病原感染。能對野毒感染進(jìn)行鑒別的成熟抗體檢測試劑只有豬偽狂犬的gE抗體試劑盒,由于疫苗的純化工藝問題,口蹄疫的非結(jié)構(gòu)蛋白的抗體目前無法產(chǎn)生理論上的鑒別診斷作用。另一方面能監(jiān)測疫病病原的試劑的商品化試劑偏少。免疫熒光抗體技術(shù)受限于基層養(yǎng)殖場熒光顯微鏡以及熒光標(biāo)記抗體的缺乏,故在多數(shù)基層養(yǎng)殖試驗室難以普及。由于達(dá)到市場需求的特異性及靈敏度并能配對的動物疫病抗體的缺乏,免疫試劑中目前的病原檢測產(chǎn)品很少,這類產(chǎn)品開發(fā)的周期長,不確定性很大,很難應(yīng)對基層疫病防控的需要。因此養(yǎng)殖場試驗室亟需合適的病原學(xué)檢測試劑。
鑒于基于核酸擴(kuò)增的分子診斷技術(shù)發(fā)展迅速,熒光PCR及電泳PCR已經(jīng)被農(nóng)業(yè)部及各省市疫控單位逐步采用,扭轉(zhuǎn)了疫病診斷中病原診斷技術(shù)空白的態(tài)勢。但對養(yǎng)殖場基層試驗室來說,PCR分子診斷技術(shù)的使用存在不少阻礙:
1、分子診斷試劑一般要冷凍保存,成本高且運(yùn)輸半徑有限;
2、核酸提取步驟復(fù)雜緩慢,基層技術(shù)人員操作困難;
3、基層單位無力購買價格偏高的PCR擴(kuò)增儀,基層技術(shù)人員也不容易掌握儀器操作要領(lǐng)。因為這些難點(diǎn)的存在,分子診斷技術(shù)一直沒有在我國養(yǎng)殖基層試驗室普及。
快靈生物開發(fā)的基因試紙卡,開啟了現(xiàn)場分子診斷步入養(yǎng)殖場的新時代。它包括基因提取試劑、恒溫擴(kuò)增試劑及免疫層析試紙卡三部分,能常溫運(yùn)輸;在常溫下同時完成
DNA/RNA樣品提取,僅需微型離心機(jī)或?qū)@帕?0分鐘內(nèi)完成操作;添加樣品模板后將反應(yīng)管密閉后放置在變溫金屬浴上保溫60分鐘,擴(kuò)增完成后將反應(yīng)管插入試紙卡槽后一步按壓就啟動溶液層析,3-5分鐘后即可目視層析試紙的線條顯色判定結(jié)果。專利申請中的基因試紙卡解決了擴(kuò)增產(chǎn)物溶液及其氣溶膠的泄漏污染導(dǎo)致后續(xù)樣品交叉污染的問題,開啟了現(xiàn)場分子診斷步入了基層養(yǎng)殖場的新時代?;蛟嚰埧苤苯訖z測到病原,很適合對健康攜毒排毒的動物進(jìn)行篩查,也適合對感染早期的動物進(jìn)行確診,大大縮短窗口期。此外,對于罕見病原或突然爆發(fā)的新病原,只要能在基因庫中查詢到該病原的基因序列,基因試紙卡能最快在一周內(nèi)研發(fā)出來。該基因試紙卡的操作過程以專利磁力架,變溫金屬浴。
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