1、定位準確：取材部位解剖水平的準確定位要求誤差應 ≤ 1mm。注意各組實驗動物組織取材區(qū)位及方位的一致性和代表性。
2、操作迅速：組織離開活體后，以最快的速度浸入醛類固定液，0.5 min或最多2 min。 先準備好2mlEP管，里面盛滿預冷的醛類固定液。提示：最好在解剖前做灌注固定，而對腦、脊髓、睪丸等組織則必須做灌注固定。
3、標本尺寸大小：組織塊的粒徑大小必須與固定液的穿透率(≤0.5mm)相適應，樣品塊過大，內(nèi)部固定不良;樣品過小，觀察內(nèi)容受限?？蓞⒄障聢D取材。提示：把較大標本塊修整成符合要求的形狀時，須事先準備一個蠟盤，滴入醛類固定液，把標本浸在液滴中修整，確認每個小標本條都包含需要的結(jié)構(gòu)內(nèi)容，再用牙簽挑出三小塊，放入2ml EP管，密閉，4℃保存。
4、操作輕柔、清潔：取材操作動作始終保持輕柔，盡可能避免金屬器具對組織的夾持、擠壓或牽拉，所用器具必須清潔，使用緩沖液清洗。
5、保持低溫環(huán)境：為降低自溶酶活性，在4℃低溫條件下取材，容器和器械預冷;將修整好的標本塊放入醛類固定液后，4℃冰箱保存。
提示：
?初固定之后，盡早進入制備程序;存放3天以上，須更換固定液。
?注意：既要保持低溫，又要避免EP管接觸冰塊，固定液 要充滿標本小瓶，蓋緊瓶蓋，用膠布加固，以免郵寄途中液體滲出。
為了得到精美的TEM照片，請務必認真做好最關(guān)鍵的第一步取材!
1、確認細胞數(shù)量≥105，根據(jù)研究目的，選擇最佳取材時間;
2、調(diào)整醛類固定液pH與培養(yǎng)基pH相同并等滲;
3、貼壁細胞用柔軟細胞刮子輕輕刮起，成細胞懸液;
4、把細胞懸液置入潔凈離心管，或圓底EP管(2ml);
5、選擇合適的離心速度和時間，3000-5000轉(zhuǎn)，5~10分鐘，形成細胞團塊;
6、用牙簽輕輕挑起細胞團塊，若致密柔韌，即棄上清，注入新鮮醛類固定液，4℃保存;
7、及時送實驗室，進入電鏡樣品制備程序。
提示：
A.取離心好的細胞團塊時，如細胞分散開，可在離心管中注入約5μl血清再離心，至EP管底部出現(xiàn)致密細胞團塊。
B. 細胞大小不同，最佳離心富集速率和時間不同。事先檢索文獻，避免反復離心損傷細胞。
C. 在上述第(5)步驟之前，用緩沖液離心1~2次，可以清除培養(yǎng)基中的雜質(zhì)。但此 操作要注意：緩沖液要新鮮，緩沖液與培養(yǎng)基等滲，pH近似。由于各實驗室配制緩沖液方法和保存時間等差別很大，由緩沖液欠佳帶來的損傷不容忽視，請使用前斟酌。
D. 快遞標本注意：
?4℃保存;
?避免標本瓶直接接觸冰塊;
?固定液要充滿樣品容器，確認蓋緊瓶蓋，最好用膠布加固，以免郵寄途中液體滲出(此種情況常見)。
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